GB∕T 38096-2019 微生物源抗生素类次生代谢产物杀线虫活性测定 浸虫法
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0.59 |
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7 |
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日期： |
2024-8-14 |
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ICS 07.080,A 21 OB,中华人民共和国国家标准,GB/T 38096—2019,微生物源抗生素类次生代谢产物,杀线虫活性测定浸虫法,Determination of nematicidal activity for microbial antibiotic,secondary metabolites―Immersion method,2019-10-18 发布2019-10-18 实施,国家市场监督管理总局,中国国家标准化管理委员会,中华人民共和国,国家标准,微生物源抗生素类次生代谢产物,杀线虫活性测定浸虫法,GB/T 38096—2019,*,中国标准出版社出版发行,北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）,北京市西城区三里河北街16号（100045）,网址 www.spc.net.cn,总编室.（010）68533533 发行中心;（010）51780238,读者服务部:（01。）68523946,中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷,各地新华书店经销,*,开本880X1230 1/16 印张0.5 字数10千字,2019年10月第一版 2019年10月第一次印刷,*,书号:155066 ?1-63649 定价 14.00 元,如有印装差错由本社发行中心调换,版权专有侵权必究,举报电话:（010〉68510107,GB/T 38096—2019,刖 テ,本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草,本标准由中国标准化研究院提出并归口,本标准起草单位：中国计量大学、中国标准化研究院〇,本标准主要起草人:许益鹏、叶子弘、俞晓平、马爱进、崔海峰、张雅芬、申屠旭萍、张蓬军、杨倩倩,I,GB/T 38096—2019,微生物源抗生素类次生代谢产物,杀线虫活性测定浸虫法,本标准规定了用浸虫法测定微生物源抗生素类次生代谢产物杀线虫活性的方法,本标准适用于微生物源抗生素,2规范性引用文件,下列文件对ラ废イシ5用是必不可少的。凡是注日期的引用文件ス册日ナ,版本适用于本文,件。凡是不注日通引箭!:件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文イNヽ,GB/T 66,3术语和,义适用于.,微生物;,微生物）,抗,生,素类次歯,谢产生的）,致死中浓,使受试线、半極亡睡,4 原理,将线虫浸入微生物獺啜素类や小学产物药剂中使线虫中步播线虫死细胞或组织染,成在显微镜下可见的红色,晶娃况,计算线虫的校正死亡,率,根据校正死亡率的几率值和赢株%续的线性回归关辔”高归曲线,计算得到LC,。,从而测定,微生物源抗生素类次生代谢产物杀线虫赢^^*"^^^,5试剂或材料,除非另有规定,仅使用分析纯试剂,5.1 水:GB/T 6682,二级水,5.2 5mg/mL胆固醇溶液:,称取适量胆固醇,溶于相应体积的无水乙醇中,配成5 mg/mL的胆固醇溶液,0.221m孔径的微孔,滤膜过滤除菌,5.3 1mol/L氯化钙溶液:,称取适量氣化钙,溶于相应体积的水中,配成1 mol/L的氯化钙溶液,0.22 Mm孔径的滤膜过滤,GB/T 38096—2019,除菌,5.4 Imol/L硫酸镁溶液:,称取适量七水合硫酸镁,溶于相应体积的水中,配成1 mol/L的硫酸镁溶液,0.22 /zm孔径的微孔,滤膜过滤除菌,5.5 1 mol/L磷酸钾缓冲液:,称取118.1 g磷酸二氢钾,23.0 g磷酸氢二钾,溶解于900 mL的水中,调节pH值至6.0,再加水定,容到1 L,0.22 /zm孔径的微孔滤膜过滤除菌,5.6 线虫专用缓冲液（M9缓冲液）：,取3.0 g磷酸二氢钾,6.0 g磷酸氢二钠,5.0 g氯化钠,1 mL浓度为1 mol/L的七水硫酸镁,用水溶,解,并定容到1 L,0.22 Rm孔径的微孔滤膜过滤除菌,5.?次氯酸钠裂解液:,取0.1 g氢氧化钠,溶于3.5 mL水中,再加入1 mL含有效氯1〇%.15%的次氯酸钠溶液混合,5.8 LB培养基:,称取10.0 g胰蛋白陈,5.0 g酵母粉,10.0 g氯化钠,加1 L水溶解,调节pH值至7.0,121 C灭菌,20 min 〇,5.9 线虫生长固体培养基（nematode growth media,NGM）：,称取2.5 g胰蛋白豚,3.0 g氯化钠,17.0 g琼脂粉,用975 mL水溶解,121c灭菌20 min,冷却到,55 C左右时,加入1 mL浓度为5 mg/mL的胆固醇溶液,1 mL浓度为1 mol/L的氯化钙溶液,1 mL,浓度为1 mol/L的硫酸镁溶液,25 mL浓度为1 mol/L的磷酸钾缓冲液,5.10 生理盐水:,取0.9 g氯化钠,溶解于!00 mL水中,配成生理盐水,0.22 ptm孔径的微孔滤膜过滤,5.11 1g/L中性红溶液：,称取适量中性红粉末溶于相应体积的生理盐水中,配成1 g/L的中性红溶液,0.22 /zm孔径的微孔,滤膜过滤,5.12 0.1%（体积分数）吐温80：,取100 mL吐温80,溶解于100 mL水中,5.13 N2 野生型秀丽隐杆线虫（Cae?20M由由 elegans , the Bristol strain N2） 〇,5.14 尿噜曉缺陷型大肠杆菌OP50（Esc/ier江五fa co厶OP50） ?,6仪器设备,6.1 电子天平:感量为0.1 g,6.2 微孔滤膜:孔径为0.22 ptm,6.3 恒温摇床:温度偏差在士 1 C以内,6.4 恒温培养箱:温度偏差在士 1 C以内,6.5 显微镜:放大倍数100倍以上,7测定步骤,7.1 大肠杆菌OP50的培养与接种,挑取大肠杆菌OP5……
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